Elektrofores - DNA restriktionsenzym

Restriktionsenzymer är enzymer som kan klyva DNA-molekyler på mycket specifika ställen baserat på DNA-molekylens bassekvens. Deras upptäckt och isolering under senare hälften av 1900-talet försåg forskarna med ett ovärderligt verktyg och expanderade snabbt inom området molekylärbiologi. Agaroselektrofores är en teknik för att separera de bitar av DNA som är resultatet av användningen av restriktionsenzymer. I denna laboration kommer eleverna att utföra agaroselektrofores på tre DNA-prover som redan har behandlats med restriktionsenzymer. Ett prov med enzymet HindIII, ett med enzymet EcoRI och ett med båda enzymerna. Det resulterande mönstret av DNA-band på agarosgelen kommer att visa att varje enzym påverkar DNA på olika sätt. Eleverna kommer inte bara att lära sig om processen med DNA-elektrofores utan lära sig teknikerna som är förknippade med processen, som att gjuta en agarosgel, ladda DNA-prover i agarosgelen och färga gelén för att visualisera DNA-banden. De kommer också att lära sig hur man bestämmer storleken på okända DNA-fragment efter att ha undersökt deras resultat.

Satsen innehåller specialbehandlade DNA-prover som inte kräver kylning eller frysning, agaros som enkelt kan smältas i ett varmvattenbad eller mikrovågsugn, TBE-elektroforesbuffert och DNA-färgning. Det finns tillräckligt med DNA för att köra 10 geler.

Innehåll:
Agarosgel 200ml
TBE Buffert 500ml 
DNA-färgning 60ml

Lambda DNA/EcoRI 100µl
Lambda DNA/HindIII 100µl
Lambda DNA/EcoRI, HindIII 100µl

Material som behövs med ej ingår i satsen:
Mikropipett 10µl
Pipettspetsar
Elektroforescell
Nätaggregat